蔡司激光共聚焦显微镜LSM980开机工作流程

 　　蔡司激光共聚焦显微镜LSM980开机工作流程

　　1、开机顺序：1→2→3→4→5→6→7

　　①②——控制器，通电电源

　　③——激光器开关(转动钥匙)

　　④——汞灯电源(开关间隔 30min以上)

　　金属卤化物灯“X-cite 120”

　　金属卤化物灯“HXP 120”

　　⑤——显微镜开关

　　⑥——载物台开关

　　⑦——电脑开关

　　2、软件名称：ZEN

　　启动ZEN软件(Blue)，选择“ZEN system”

　　Image Processing——图像处理，拷数据

　　ZEN System——拍照

　　打开之后 Initializing Hardware 硬件初始化，检测电脑跟显微镜是否连上。

　　报错“The Stogeand focsarenotyetcolibrated”，一般直接点“Skip Calibration”。

　　3、左边 Locate~定位

　　用眼睛观察，找视野

　　BF——明场

　　488——绿色，常见GFP、YFP、FITC

　　DAPI—— 蓝色，细胞核

　　RHE——红色，RFP，mCherry

　　4、Acquisition~图像获取，拍照

　　点 Smart Setup“智能设置”弹出一个对话框，点“+”添加标记的荧光染料/探针/荧光蛋白，找到之后双击加进列表。

　　三种拍摄方式：

　　A、Fastest

　　拍摄速度最快， 发射波长接近的荧光染料间存在串色现象;

　　B、Best signal

　　拍摄速度最慢; 基本避免了发射荧光的串色;

　　C、Smartest(Line)

　　结合上述两者优势，减少串色的同时拍摄速度较快，但是光路中硬件设置不能改变。

　　三种拍照方式中“Best Signal”是最常用的，速度比较慢，但效果最好。

　　5、整个操作界面在左边两列

　　(1)最左边这列“Imaging Setup”是光路图;

　　(2)右边这列“Acquisition Parameter”是需要调节的参数。其中“Acquisition Mode”拍照，“channels”通道设置图像亮度、信噪比和分辨率。

　　·“Channels”里面有刚添加的三个通道，选择任意一个通道，左边的光路可进行自动切换，因此一般不需要再自己进行修改光路。除非液流体的自发荧光或者一些有串色风险的，可以手动拖动接收范围。